层流手术室的维护与保养主要包括以下几个方面：
温度和湿度控制：手术室的温度应保持在22-25℃，相对湿度为40-60%。手术过程中应保持正压状态，确保手术室各区域的门保持关闭，避免同时打开出、入门。12
设备管理：配有专职人员负责净化设备的管理、日常维护和清洁保养。净化空调系统应在手术前30分钟开启，手术结束后30分钟关闭。每周对新风机组设备进行清洁，每两周对净化机组设备进行清洁，并记录。
过滤器更换：各级过滤器应按照要求定期更换。一般建议初效过滤器每三个月清洗，每六个月更换；中效过滤器每六个月更换；高效过滤器每年更换。初效过滤器金属网应定期拆下清洗，中效过滤器应定期检查有无破损或堵塞，高效过滤器在提示过滤网脏时必须更换，或使用两年后必须予以更换。
空气净化系统：送风口应定期清洁，回风口格栅应每天擦拭一次，过滤网每周清洁1-2次，风道应1-2年清洁一次。空调内部加湿器、表冷器下的水盘和水塔、挡水板、凝结水的排水点应定时进行检查、清洁与消毒。
环境卫生控制：洁净手术室的环境卫生控制指标应符合技术规范要求。静态含尘浓度和沉降菌浓度以综合性能评定的测定数据或年检数据为准。手术室投入运行前应经有资质的工程质检部门进行综合性能全面评定，并作为手术室基础材料存档。
此外，层流手术室的维护与保养还需要注意以下几点：
- 人员流动控制
：控制人员流动是保持手术室清洁的关键措施。手术过程中应尽量减少人员活动，避免向外打开门户走廊，防止污染空气。3
- 患者管理
：患者在进入手术室前应脱掉鞋子和袜子，更换衣服并戴上帽子。在手术前脱掉衣服，减少患者在手术台上的翻转，以避免携带细菌。
- 无菌操作
：无菌操作和污染操作应在不同的房间进行。如果必须在同一房间内进行，应先进行无菌操作，再进行污染操作。连接台的操作人员应在两台之间严格刷手，消毒手臂，更换无菌操作服和手套。
